كيفية تحضير عينة البراز بالتفصيل
يتم تحضير عينة البراز بعدة طرق وسوف نستعرض هذه الطرق في هذا المقال وهي كالآتي:
1. اللطخة Direct Smear
هذه الطريقة سهلة وسريعة وتستخدم أساساً لفحص أكياس الطفيليات ذات الخلية الواحدة مثل الأميبا وأكياسها والجيارديا - لامبليا وأكياسها.
تتلخص خطوات هذه الطريقة كالآتي:
- ضع قطعة صغيرة من البراز وبالذات الجزء الذي به دم أو مخاط ومن علي السطح بواسطة مرود خشبي وأمزجها جيداً علي الشريحة بواسطة المرود.
- ضع غطاء الشريحة Cover وافحص العينة تحت الميكروسكوب مستعملاً العدسة الشيئية 10x ثم بعد ذلك بالعدسة الشيئية 40x محاولاً العثور علي الطفيليات وحيدة الخلية.
- ثم بعد ذلك ضع نقطة من محلول اليود المائي وذلك حتي يسهل التعرف علي أكياس الأميبا لأنها تأخذ لون اليود دون غيرها.
ملحوظة: ضع محلول اليود المائي بعد الانتهاء من الفحص الأولي بمحلول الملح لأن اليود يقتل الطفيليات وحيدة الخلية غير المتكيسة ( تروفوزنت ).
2. الترسيب Sedimentation
وتستخدم هذه الطريقة لتحضير عينات البراز بغرض فحص الطفيليات التي تكون بويضاتها أثقل وزناً من محلول الملح المخفف وبالتالي تترسب البويضات، مثل: بويضات الإسكارس الملقحة، بويضات البلهارسيا بنوعيها، يرقات سترنجلويدس وبويضات الفاشيولا والهيمنولبس نانا ودمنيوتا.
الخطوات:
- تؤخذ قطعة من البراز بحجم البندقية وتوضع في إناء زجاجي سعة 60 مل يضاف محلول ملح الطعام المخفف ( 0.007 % ) إلي ربع الإناء.
- يقلب البراز في المحلول جيداً بواسطة مرود زجاجي.
- يصفي تلقائياً بمصفاة من سلك النحاس في كأس مخروطي.
- يترك الكأس هادئاً لمدة 20 - 30 دقيقة.
- يفحص الراسب بواسطة أخذ جزء منه بواسطة ماصة ويوضع علي شريحة ميكروسكوب وتغطي بغطاء الشريحة.
3. التعويم Floatation
وتستخدم هذه الطريقة لتحضير عينات البراز بغرض فحص الطفيليات التي تكون بويضاتها أخف وزناً من محلول الملح المشبع وبالتالي تعوم البويضات علي السطح مثل بويضات الانكلستوما، الأكسيورس، الإسكارس غير الملقحة، التينيا وبويضات التريكوكفلس ( تريكوريس تريكيورا ) وبويضات الهتروفيس.
الخطوات:
- تؤخذ قطعة من البراز في حجم حبة الفول الصغيرة وتوضع في إناء من الزجاج سعة 60 مل مع قليل من الملح المشبع ( يحضّر بإضافة واحد كيلو جرام لكل 2 لتر ماء ) بقدر ربع الإناء.
- تمزج قطعة البراز بواسطة مرود زجاجي.
- يصفي المحلول بمصفاة من سلك نحاسي مُعد لذلك.
- توضع المصفاة في القمع في فوهة دورق مخروطي.
- يكمل ملء الدورق بنفس محلول الملح حتي فوهتها العليا.
- توضع شريحة فوق فوهة الدورق.
- تترك لمدة 20 - 30 دقيقة ثم ترفع الشريحة باحتراس وتقلب وتوضع تحت الميكروسكوب.
4. طريقة محلول صوديوم Saline
- نقطة محلول مع جزء من العينة وتطحن علي شريحة ثم تأخذ نقطة منها علي شريحة أو ممكن نستعمل اليود بدلاً من المحلول وهي الأكثر شيوعاً في المعامل الخاصة وتصلح لمعظم الطفيليات والديدان المفلطحة والبلهارسيا والفاشيولا وكذلك الديدان الأسطوانية.
5. طريقة الفورمول والإيثر لتركيز الطفيليات Formol Ether Concentration Tech
- يؤخذ حوالي 2 مل من البراز في زجاجة صغيرة بسدادة وتمزج مع 10 مل محلول ملحي فسيولوجي وترج.
- ترشح خلال طبقتين من الشاش في أنبوبة سنترفيوج حجم 10 مل.
- تدار في السنترفيوج الكهربائي لمدة دقيقة واحدة، وإذا كان السائل العلوي عكراً يضاف 10 مل أخري من كلوريد الصوديوم الفسيولوجي أكثر من مرة وتدار لمدة دقيقة أخري حتي يصبح السائل العلوي رائقاً ويسكب الرائق ويترك الراسب في الأنبوبة.
- يضاف 10 مل من محلول الفورمالين إلي الراسب بالأنبوبة ويحرك ويمزج جيداً ويترك لمدة 5 دقائق.
- يضاف 3 مل من الإيثر أو البنزين وتغلق الأنبوبة وترج بشدة لمدة نصف دقيقة ثم تدار في السنترفيوج لمدة دقيقة.
- يتكون في الأنبوبة أربع طبقات: الطبقة الأولي: إيثر، الطبقة الثانية: فضلات، الطبقة الثالثة: محلول فورمالين، الطبقة الرابعة: الراسب محتوي علي الطفيليات.
- يتم التخلص من الطبقات العلوية الثلاثة في الأنبوبة ويترك الراسب فقط ويمزج هذا الراسب جيداً.
- تؤخذ نقطتين وتوضع علي شريحة بحيث توضع كل نقطة في مكان منفصل عن الآخر وتغطي النقطة الأولي بغطاء الشريحة أما الثانية فيضاف إليها نقطة محلول يود وتغطي بغطاء.
- تفحص النقطة الأولي بالعدسة 10x ، 40x لجميع الطفيليات وتعد.
- تفحص النقطة الثانية بالعدسة 10x ، 40x للبحث عن الأكياس وعددها.