فكرة عن الباثولوجي
يختص قسم الباثولوجي بدراسة وتشخيص الأمراض اعتماداً علي الفحص الظاهري والفحص المجهري لأنسجة وخلايا العضو أو الجزء المصاب وملاحظة أي تغيرات به. ولتحقيق ذلك من الضروري الحفاظ علي التركيب والشكل العام والأنسجة والخلايا المراد فحصها بحيث تكون في حالة لا تختلف عن التي كانت عليها بالجسم وللوصول إلي ذلك نتبع الخطوات التالية:
أولاً حفظ العينة في أحد المحاليل المثبتة:
لمعرفة المحاليل المثبتة يجب أولاً معرفة خواص المثبت الجيد:
- يتخلل الأنسجة بسهولة وبسرعة.
- يعمل في درجة الحرارة العادية.
- لا يحدث ضرر بالنسيج.
- يعمل علي تيبس النسيج نوعاً ما بحيث يصبح قوامه سهل التقطيع.
- لا يتعارض مع الصبغات المختلفة عند صبغ العينة.
- يستمر مفعوله لمدة طويلة.
- يقتل الجراثيم والفطريات التي تساعد علي تحلل الأنسجة.
أنواع المثبتات الجيدة
يستخدم الفورمالين في تثبيت العينات النسيجية بصفة عامة، حيث يحمي النسيج من عمليتي التعفن والتحلل التي تسببها بعض أنواع من البكتيريا، وأيضاً يحفظ النسيج بصورة أقرب مما يكون عليه داخل الكائن الحي. والفورمالين Formalin هو أكثر المحاليل المثبتة استعمالاً.
بعض مخاطره، الفورمالدهايد وهو مادة متفجرة فيجب إبعاده عن أي مصدر حراري يعمل علي امتصاص سوائل الجسم بسرعة ويجفف الجلد عند ملامسته مباشرة ويفضل ارتداء قفازات واقية عند الاستعمال لأنه يؤثر علي حدقة العين عند التعرض له باستمرار ويجب تهوية المكان جيداً عند الاستعمال لأن أبخرته تعتبر خانقة ويفضل ارتداء كمامات عند استخدامه.
الفورمالدهايد CH2CO، هو عبارة عن غاز عديم اللون ويذوب في الماء بنسبة 40% ليكوّن ما يعرف بالفورمالين Formalin، وهو مركب عضوي من أبسط الألدهيدات الأليفاتية ويعتبر من الغازات سريعة الاحتراق، ويمتاز بأنه سريع النفاذية ويكسب النسيج صلابة قوية مععدم التأثير علي حجم الخلايا، ويستعمل كمثبت وبالإمكان تحضيره بالمختبر عن طريق إذابة البارافورمالدهايد في الماء عند درجة حرارة 60 درجة مئوية ثم يضاف بضع قطرات من هيدروكسيد الصوديوم المركز حتي يصبح لون المحلول صافياً عندما يصل الأس الهيدروجيني إلي 7.2
مدة تثبيت العينة من 12 - 24 ساعة علي الأقل حسب حجم العينة.
ثانياً تقطيع العينة
بعد تثبيت العينة في أحد المحاليل المثبتة وكتابة رقم العينة، يتم تقطيع العينة بأخذ قطاع من العينة طوله 1 سم وسمكه أقل من نصف سم وتوضع في شاشة صغيرة أو علبة صغيرة ذات ثقوب ومرفق معها رقم العينة.
ثالثاً مرحلة التمرير
تغسل العينة بالماء الجاري لمدة ربع ساعة ثم تمرر بعد ذلك باحدى الطرق الآتية:
مرحلة التمرير اليدوي للقطاعات
1- مرحلة التجفيف Dehydration
وإزالة الماء منها لأن الماء لا يذوب في البرافين ولا يمتزج به وذلك بوضع العينات في كحولات تصاعدية.
في مرحلة التمرير يتم وضع كحول إيثيلي 100% مرتين وذلك لأن الأول يقوم بسحب الماء من العينة وإحلال المحول محلها والثاني للتأكد من خلو العينة من الماء.
2- مرحلة الوضوح
هذه الخطوة لإزالة الكحول من العينة وتنقية العينة فتكون شفافة لأن الزايلول Xylol يساعد علي وضوح النسيج، ويتم وضع زايلول مرتين وذلك للتخلص من الكحول تماماً تمهيداً للتشبع بشمع البرافين ولإعطاء العينة الوضوح التام.
3- مرحلة غمر العينة
هي التخلل للعينة حيث يتخلل الشمع العينة ويحل محل الزايلول.
توضع العينة بعد ذلك في شمع برافين لين سائل درجة انصهاره 45 درجة من 1 - 3 ساعات.
ثم توضع في شمع برافين صلب سائل درجة انصهاره 54 - 56 درجة لمدة 1 - 3 ساعات.