تفاعل البوليميريز المتسلسل Polymerase Chain Reaction, PCR
تهدف تقنية PCR إلي تضخيم جزيئات قليلة من الحمض النووي DNA، بعد استخلاصه من خلايا أو سوائل الجسم وبالتالي الحصول علي كميات كبيرة منه يمكن إجراء التحليل عليه. يمكن اعتبار تقنية PCR ترجمة مبسطة لعملية استنساخ الحمض النووي DNA أثناء الانقسام الخلوي.
تقنية PCR
تتألف تقنية PCR من ثلاث مراحل في دورة واحدة:
- مرحلة التمسخ الحراري Thermal Denaturation لجزئ DNA الهدف، أي فصل الطاق المزدوج ds-DNA إلي طاقين منفصلين ss-DNA ، وتتم هذه المرحلة عند درجة حرارة 94 م.
- مرحلة تشفع البادئات Primers Annealing ، أي ارتباط كلا البادئتين مع الطاقين المنفصلين عند درجة حرارة 55 م.
- تطاول البادئات المتشفعة Annealed Primers Extension بمساعدة إنزيم البوليميريز وذلك بإضافة dNTPs ابتداءً من البادئة وفي الاتجاه 3 ← 5 ، وتتم هذه المرحلة عند درجة حرارة 72 م.
تعاد هذه الدورة ذات الخطوات الثلاثة عدداً من المرات مما يؤدي إلي زيادة جزيئات DNA بشكل أسي. ويعمل عامل التضخيم بالمعادلة الآتية = n ( 1 + E ) x ، حيث:
n = الكمية البدئية للحمض النووي الهدف.
E = فعالية التضخيم Efficiency
X = عدد دورات PCR
ويمكن تطبيق تقنية PCR علي الحمض النووي RNA بإجراء خطوة أولية وهي تكوين نسخة متممة من DNA ( cDNA ) " Complementary DNA.
يمكن الكشف عن منتجات التضخيم Amplicons بعدة طرق أهمها:
- الرحلان الكهربائي علي هلامة الآغاروز Agarose Gel Electrophoresis.
- التهجين Hybridization باستعمال مسابر موسومة بإنزيم Enzyme Labeled Probes.
- استخدام بادئات موسومة بإنزيم أو مادة تألقية Enzyme Fluorescent Labeled Primers.
- تقنية تعدد أشكال أطوال الشدف الحصرية Restriction Fragment Length Polymorphism, RELP.
- التنسيل Cloning.