اختبار العدّ الكلي للدم يدوياً CBC Manual
تقدير وحساب بعض مكونات الدم الأساسية مثل ( HB% - RBC - WBC - PLT - HCT - MCV - MCH - MCHC ) وأيضاً الخلايا الشبكية وكل هذه التحاليل موجودة بنسب طبيعية في الجسم وأي اختلاف في هذه النسب يكون له مدلول مرضي.
1- تقدير نسبة الهيموجلوبين في الدم
* تقدير الهيموجلوبين بطريقة جهاز ساهلي ( Sahli's Method )
تعتمد هذه الطريقة علي مقارنة الألوان وفيها يتحول الهيموجلوبين بواسطة حمض الهيدروكلوريك إلي هيماتين حمضي ويتكون هذا الجهاز من ثلاثة أنابيب:
أنبوبتان ملونتان والثالثة ( التي توجد في المنتصف ) تستخدم لإجراء الاختبار ، وهذه مدرجة لكي تعطي قراءة الهيموجلوبين بطريقتين:
إما بالنسبة المئوية % أو بالجرام.
* ملحوظة: هذه الطريقة غير دقيقة ويمكن استخدامها عند إجراء مسح صحي خارج المعمل.
--------------------------------------------------------------------
* تقدير الهيموجلوبين بطريقة الدرابكن ( Drabkin Method )
تقدر كمية الهيموجلوبين بقياس اللون الناتج عند اتحاده بالسيانيد ( محلول جاهز من الشركات المنتجة ) ثم يقاس بجهاز الطيف الضوئي ( Spectrophotometer ) الموجود بجميع معامل التحاليل الطبية.
ويجب أن يكون لون محلول التخفيف أصفر باهتاً رائقاً يعطي درجة امتصاص صفر عند قراءته علي جهاز القياس الطيفي عند طول موجي 540 نانومتر باستخدام الماء المقطر ( Blank ).
ويحفظ محلول الهيموجلوبين المخفف في زجاجة معتمة ( بنية اللون ) لعدة شهور في درجة حرارة الغرفة.
* كيفية العمل
1- يوضع 5 مل من محلول درابكين + 20 ميكرولتر دم ( Fresh Blood ) باستخدام ماصة أوتوماتيكية.
2- ترج الأنبوبة ثم تترك لمدة 3-5 دقائق حتي يتم التفاعل.
3- يقرأ عند طول موجي 540 نانومتر بعد ضبط صفر الجهاز باستخدام محلول درابكين.
4- تقرأ العينة علي الجهاز ثم تحسب النتيجة بالقانون التالي:
درجة امتصاص الاختبار × 3.6 = تركيز الهيموجلوبين بالجرام / 100 مليلتر × 6.9 = نسبة HB %
* النسب الطبيعية
الرجال -------------------------- ( 18 - 13 )
السيدات ------------------------- ( 16.5 - 11.5 )
سيدات حوامل ------------------- ( 13 - 11 )
أطفال ( حديثي الولادة ) --------- ( 19.5 - 16.5 )
أطفال ( 3 شهور ) -------------- ( 18.5 - 15.5 )
أطفال ( سنة ) ------------------ ( 15.5 - 13.5 )
أطفال ( 3 - 6 سنوات ) --------- ( 14 - 12 )
أطفال ( 10 - 12 سنة ) --------- ( 14.5 - 12 )
--------------------------------------------------------------------
2- العدّ الكلي لكرات الدم الحمراء R.B.Cs Counting
* كيفية عدّ كرات الدم الحمراء
الحساب: عدد كريات الدم الحمراء / مم3 = عدد الكريات × 10000
--------------------------------------------------------------------
* أخطاء عملية تؤدي إلي زيادة العدد
- حجم الدم أكثر من 20 ميكرولتر أو حجم المحلول أقل من الحجم المطلوب.
- عدم مزج العينة جيداً مع محلول التخفيف.
- توزيع كريات الدم الحمراء في شريحة العدّ غير متوازن.
- ملء خاطئ لشريحة العدّ أو عدّ جميع كرات الدم الحمراء الملامسة للخطوط الجانية.
* أخطاء عملية تؤدي إلي نقص العدد
- حجم الدم أقل من 20 ميكرولتر أو حجم المحلول أكثر من الحجم المطلوب.
- إرجاء العدّ لمدة طويلة.
- وجود جلطة صغيرة في العينة.
- وجود فراغات هوائية أو شوائب.
- استعمال شريحة غير نظيفة.
* أسباب الزيادة المرضية في عدد كريات الدم الحمراء
- نقص الأكسجين.
- أمراض القلب وأمراض تليف الرئتين.
- وجود بعض أنواع الهيموجلوبين غير الطبيعي.
* أسباب نقص كريات الدم الحمراء
- أمراض الدم مثل اللوكيميا وفشل نخاع العظام ... إلخ
--------------------------------------------------------------------
3- قياس نسبة الهيماتوكريت Haematocrit ( HCT ) or Packed Cell Volume ( PCV )
النسب الطبيعية:
--------------------------------------------------------------------
* معاملات كرات الدم الحمراء Blood Indices
أ- متوسط حجم الكرية Mean Corpuscular Volume ( MCV )
- فقر الدم بنقص الحديد Iron Deficiency Anemia
- أنيميا البحر المتوسط Thalassemia
- نقص حامض الفوليك Folate Deficiency
- نقص فيتامين B12 Deficiency
ب- متوسط حجم هيموجلوبين كرة الدم الحمراء Mean Corpuscular Haemoglobin ( MCH )
ج- متوسط تركيز الهيموجلوبين في كريات الدم الحمراء Mean Corpuscular Haemoglobin Concentration ( MCHC )
د- قياس توزيع كريات الدم الحمراء Red Cell Distribution Width ( RDW )
--------------------------------------------------------------------
4- العدّ الكلي لكرات الدم البيضاء Total Leucocytic Counting
* كيفية عدّ كرات الدم البيضاء
* طريقة العدّ لكرات الدم البيضاء
* الأخطاء العملية التي تؤدي إلي زيادة أو نقص عدد كريات الدم البيضاء
- البالغين: 4000 - 11000 / مم3
- أطفال ( عام ): 6000 - 18000 / مم3
- أطفال ( 4 - 7 أعوام ): 5000 - 15000 / مم3
- أطفال ( 8 - 12 أعوام ): 4500 - 13500 / مم3
* العدّ النوعي لخلايا الدم البيضاء White Blood Cell Differential Count
- خلايا متعادلة ( Neutrophils ): المعدل الطبيعي 40 - 75 %
- خلايا حامضية ( Eosinophils ): المعدل الطبيعي 1 - 6 %
- خلايا قاعدية ( Basophils ): المعدل الطبيعي 1 %
- خلايا ليمفاوية ( Lymphocytes ) المعدل الطبيعي 20 - 45 %
- خلايا وحيدة النواة ( Monocytes ) المعدل الطبيعي 2 - 10 %
--------------------------------------------------------------------
5- الصفائح الدموية Platelets
الصفائح الدموية هي أصغر خلايا الدم ولها دور هام جداً في تجلط الدم والحماية من النزيف ولذلك فإن انخفاض عددها يعرض الشخص للإصابة بالنزيف في أي جزء من الجسم.
القيم الطبيعية: 150 حتي 450 ألف خلية.
* كيفية العدّ للصفائح الدموية
--------------------------------------------------------------------
* الزيادة في عدد الصفائح الدموية تعرف بـ Thrombocytosis
تحدث هذه الزيادة نتيجة الإصابة ببعض الأمراض مثل:
- فقر الدم الناتج عن نقص الحديد Iron Deficiency Anemia
- فقر الدم الانحلالي Haemolytic Anemia
- مرض الدرن T.B Mycobacterium Tuberculosis
- مرض زيادة إنتاج كرات الدم الحمراء Polycythemia
- أحياناً تكون الزيادة فسيولوجية مثل السكن في المرتفعات أو الجهد الكبير.
* الانخفاض في عدد الصفائح الدموية تعرف بـ Thrombocytopenia
هذا النقص في عدد الصفائح الدموية يسبب القابلية للنزف ويحدث هذا النقص نتيجة لعدد من الأسباب أهمها:
- أسباب أولية أو ما يسمي ( I.T.P - Idiopathic Thrombocytopenia Pupura ) وهي أسباب غير معروفة.
- أسباب ثانوية وهذا ناتج عن الإصابة ببعض الأمراض مثل ( العدوي المزمنة - السرطان - تضخم في الطحال - أمراض الكبد - تناول الأدوية التي تثبط نشاط النخاع العظمي ).
- أسباب أخرى مثل ( الأطفال حديثي الولادة - عدم تناول كميات كافية من العناصر الهامة في تصنيع الدم مثل فيتامين B12 وحامض الفوليك Folic Acid ).
* فحص معدل حجم الصفائح MPV, Mean Platelet Volume
يفحص معدل حجم الصفائح بالدم.
* القيم الطبيعية: 7 إلي 11
القيم العالية لـ MPV يمكن أن تشير إلي تفكك الصفائح الدموية، وتكون صفائح جديدة مكانها أكبر.
ويمكن أيضاً قياس توزيع الصفائح الدموية PWD, Platelet Distribution Width
--------------------------------------------------------------------
6- الكشف عن الخلايا الشبكية Reticulocyte Cells
التعريف
الخلايا الشبكية هي عبارة عن كريات الدم الحمراء الغير ناضجة، وليس فيها نواة وحجمها أكبر قليلاً من حجم الكريات الناضجة، ويبلغ قطرها بين 7.5 - 8.5 ميكرون وتحتوي علي بقايا الحمض النووي RNA ومن الشبكة الإندوبلازمية الغنية بالريبوسومات وقليل من الميتوكوندريا ويأخذ السيتوبلازم اللون الأحمر أو البني الغامق.
الهدف من إجراء الاختبار
يستخدم هذا الاختبار للكشف عن سلامة النخاع العظمي Bone Marrow وتشخيص الحالات المرضية ( فقر الدم ) والأمراض النزيفية ( الحالات الشديدة )، ويعمل هذا الاختبار لمعرفة مدي فعالية علاج فقر الدم وذلك عن طريق عدّ الخلايا الشبكية ومعرفة نسبتها.
النسب الطبيعية للخلايا الشبكية
- البالغين: من 0.2 - 2 % من عدد كريات الدم الحمراء
- حديثي الولادة: تكون نسبتها بين 2 - 6 %
الاختلافات المرضية
* يزداد عدد الخلايا الشبكية في جميع الحالات التي يزداد فيها نشاط النخاع العظمي وتسمي هذه الزيادة Reticulocytosis كما في الحالات التالية:
- فقر الدم المنجلي Sickle Cell Anemia
- مرض أنيميا البحر الأبيض المتوسط Thalassemia
- فقر الدم بعد النزيف الحاد Acute Post-Hemorrhagic Anemia
- فقر الدم الانحلالي Hemolytic Anemia
- الأمراض الوراثية الناتج عنها وجود كريات الدم الحمراء المكورة Hereditary Spherocytic Anemia
* ينقص عدد الخلايا الشبكية في جميع الحالات التي يزداد فيها إنتاج كريات الدم الحمراء ويسمي هذا النقص Reticulocytopenia ويحدث هذا في الحالات التالية:
- فقر الدم الخبيث Pernicious Anemia
- فقر الدم اللاتنسجي Aplastic Anemia
مدة حياة الخلايا الشبكية
تقدر فترة تكوين الكريات الحمراء داخل نخاع العظم بأسبوع من الزمن بينما فترة حياة الخلايا الشبكية تقدر بيوم أو يومين ولا تلبث بعدها إن تفقد المواد المتبقية والسابقة الذكر وتتحول إلي كرية حمراء ناضجة ولكن بعض هذه الخلايا تخرج إلي الدورة الدموية كما هي.
الأهمية الطبية
تكمن الأهمية الطبية لمعرفة عدد الخلايا الشبكية في ما يلي:
1- تدل علي أحوال النخاع العظمي، فإذا كان إنتاج النخاع العظمي لكريات الدم الحمراء أكثر من الطبيعي فإنه تزداد عدد الخلايا الشبكية في الدورة الدموية الطرفية، أما إذا كان النخاع العظمي لكريات الدم الحمراء أقل من الطبيعي فيقل تبعاً لذلك عدد الخلايا الشبكية في الدورة الدموية الطرفية.
2- تساعد في تشخيص بعض أنواع فقر الدم، فمثلاً ينقص عدد الخلايا الشبكية في فقر الدم اللاتنسجي وترتفع في وجود الأمراض الوراثية التي ينتج عنها وجود كريات مكورة Hereditary Spherocyte
3- تساعد في متابعة علاج بعض أنواع فقر الدم، فإذا كان العلاج مؤثراً عاد عدد الخلايا الشبكية إلي المعدل الطبيعي، أما إذا كان غير مؤثر بقي عدد الخلايا الشبكية غير طبيعي.
فمثلاً في فقر الدم Megaloplastic Anemia يرتفع عدد الخلايا الشبكية عن المعدل الطبيعي بعد العلاج فإذا بقي العدد كما هو ولم يرتفع فإن العلاج لا تأثير له.
الطريقة العملية للاختبار
- في أنبوب نخلط كميتان متساويتان ( نقطة + نقطة ) من عينة الدم ومن صبغة New Methylene Blue أو صبغة Brilliant Cresyl Blue
- نضع الأنبوب بعض الخلط في الحضانة لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
- نقوم بعمل فيلم علي شريحة زجاجية.
- بعدما يجف الفيلم نفحصه بالميكروسكوب باستخدام العدسة الزيتية.
- نقوم بعدّ الكريات الشبكية وكريات الدم الحمراء في 10 Fields .
- نطبق المعادلة التالية:
الخلايا الشبكية = مجموع عدد الخلايا الشبكية / مجموع كريات الدم الحمراء × 100
النتيجة ( الرقم ...... % )
--------------------------------------------------------------------